Международный эндокринологический журнал 3 (51) 2013

Введение

В настоящее время сахарный диабет (СД) продолжает оставаться одной из наиболее важных проблем мировой медицины и здравоохранения [2, 8]. Инфекционные воспалительные заболевания почек и мочевыводящих путей встречаются у 25 % больных с СД. Обострение хронического пиелонефрита, как и любой другой патологический процесс, протекает на фоне образования активных форм кислорода (АФК) и интенсификации свободнорадикального окисления биосубстратов. Также к одним из важнейших патогенетических звеньев развития СД и его осложнений относят длительную хроническую гипергликемию, которая является пусковым механизмом в инициации оксидантного стресса (ОС) [1, 5, 11].

Считается, что ОС во время атаки АФК в первую очередь подвергаются белки плазматических мембран, которые, в свою очередь, являются потенциальными стимуляторами перекисного окисления липидов (ПОЛ). В серии исследований процесс окислительной модификации белков (ОМБ) рассматривается как один из возможных факторов инактивации ферментов и изменения структурной организации в состоянии ОС [3]. Подтверждением первичности ОМБ является наличие явных изменений при ОС в области анулярных липидов, что говорит о ведущей роли окисления белков в деструкции клеточной мембраны [7]. Ишемические изменения в органах и тканях сопровождаются гиперактивацией свободнорадикальных процессов и нарушением функционально-структурной организации биомембран [3].

Защиту тканей от действия АФК при ОС осуществляют ферментные системы. К специфическим антиоксидантным ферментам можно отнести супероксиддисмутазу (СОД), каталазу, глутатионзависимые пероксидазы и трансферазы. Cпонтанное окисление белков характеризует окислительный потенциал организма, а стимулированное характеризует степень резервно-адаптационных возможностей организма [9, 10].

Таким образом, ОМБ играет ключевую роль в молекулярных механизмах ОС, а ОС является важной цепочкой многих патологических процессов в организме при различных заболеваниях и требует дальнейшего изучения.

Целью нашей работы является оценка степени ОС и состояния антиоксидантной системы у пациентов с обострением хронического пиелонефрита (ХП) на фоне СД 2-го типа.

Материалы и методы исследования

Под клиническим наблюдением находились 88 больных с обострением ХП на фоне СД 2-го типа в возрасте от 43 до 80 лет. Средний возраст больных составил 65,4 ± 2,3 года. Большинство пациентов составили женщины — 79,5 %, мужчин было 20,5 %. Наблюдение больных пожилого возраста объясняется тенденцией преобладания СД 2-го типа в популяции. У 20,5 % больных СД 2-го типа был выявлен впервые, у 39,8 % давность заболевания составила 1–5 лет, у 13,6 % — 5–10 лет, у 26,1 % — более 10 лет. ХПН у 60,2 % у больных был в анамнезе в течение 1–5 лет, у 20,5 % — 5–10 лет, и 19,3 % больных имели жалобы, но никогда не обращались за специализированной помощью. Наблюдение и лечение проводились на базе эндокринологического стационара многопрофильной больницы № 5 г. Луганска.

Диагноз устанавливали на основании данных анамнеза, клинических проявлений, лабораторных и инструментальных методов исследования. Всем пациентам проводили общеклинические и биохимические обследования. Анатомо-функциональное состояние почек исследовали с помощью ультразвукового метода.

Для исследования прооксидантного состояния, вызванного воспалительным процессом в почках, дополнительно проводили изучение ОМБ по методу Левина в модификации Дубининой [8]. У обследуемых больных кровь брали утром натощак. Как антикоагулянт использовали раствор гепарина. В сыворотке крови определяли степень спонтанного и металлкатализируемого окисления (МКО) белков. Метод оценки ОМБ основан на реакции взаимодействия окисленных аминокислотных остатков с 2,4-динитрофенилгидразином с образованием 2,4-динитрофенилгидразонов. Для регистрации ОМБ предварительно проводили их осаждения с помощью 20% раствора трихлоруксусной кислоты. Оптическую плотность образовавшихся динитрофенилгидразонов регистрировали на спектрофотометре UNICO 2800 при длинах волн 274 и 363 нм. Степень ОМБ выражали в единицах оптической плотности. На процессы пероксидации белков указывает накопление в исследуемом материале продуктов белковой деструкции в виде альдегидпроизводных (АДФГ) и кетопроизводных динитрофенилгидразонов (КДФГ), которые являются маркерами ОМБ. При определении ОМБ используются два показателя: спонтанная и индуцированная (металлкатализируемая) ОМБ. Первый показатель характеризует количество уже окисленных белков, второй указывает на количество субстрата для окисления и возможность его вовлечения в эти процессы. Его можно рассматривать как показатель устойчивости системы к пероксидации.

Изучение антиоксидантной активности оценивали при помощи определения активности СОД, которую проводили методом аутоокисления адреналина [6]. Величины оптической плотности растворов регистрировали на спектрофотометре UNICO 2800 при длине волны 347 нм.

Контрольную группу составили доноры станции переливания крови без признаков воспалительных заболеваний мочеполовой системы.

Анализ полученных данных проводили методом математической обработки с использованием стандартного пакета программ с определением критерия Стьюдента.

Исследуемые больные были разделены на две группы. Первая группа (43 пациента) получала так называемую базовую терапию, состоящую из антибактериального препарата ломефлоксацин (ломадей) 1 таблетка (0,4 г) 1 раз в сутки или цефтриаксон (лораксон, эмсеф) 1,0 внутримышечно 2 раза в сутки в течение 10 дней в зависимости от степени изменений мочевого синдрома, и сахароснижающую терапию. Вторая группа (45 пациентов) получала базовую антибактериальную терапию, сахароснижающую терапию, а также комбинацию препаратов канефрон Н по 50 капель или по 2 драже 3 раза в сутки внутрь независимо от приема пищи и тиотриазолин 2,5% раствор по 2,0 мл внутримышечно 1 раз в сутки ежедневно в течение двух недель.

Результаты исследования и их обсуждение

Анализ содержания продуктов спонтанной ОМБ в сыворотке больных обеих групп до лечения показал значительное повышение уровня производных динитрофенилгидразонов, вероятно превышающий такой уровень в группе контроля (табл. 1). А именно: первая группа имела повышение АДФГ на 15,8 %, КДФГ — на 15,5 %, вторая группа — на 18,8 и 17,4 % соответственно.

После лечения наблюдалось снижение уровня спонтанного окисления белков как в первой, так и во второй группе, однако показатели первой группы снизились меньше, чем во второй группе. Так, показатели АДФГ первой группы стали ниже на 5,64 %, а второй группы — на 7,25 %. Значение КДФГ первой группы уменьшились на 4,08 %, второй — на 6,84 %. Под влиянием лечения наблюдалось достоверное снижение уровня АДФГ и КДФГ, что связано с более эффективным функционированием системы антиоксидантной защиты. Спонтанное окисление белков в сыворотке у пациентов с обострением ХП на фоне СД 2-го типа сопровождается увеличением содержания КДФГ, что является поздним маркером ОМБ и характеризует дальнейшее окисление белков. Также наблюдалось повышение АДФГ, образовавшегося на стадии инициации свободнорадикального окисления.

При оценке металлкатализируемой ОМБ было установлено весьма существенное увеличение степени деструкции белков. По сравнению с группой конт-роля первая группа имела увеличение АДФГ на 17,4 %, КДФГ — на 13,7 %, вторая группа — на 17,7 и 16 % соответственно (табл. 2).

После лечения уровень динитрофенилгидразонов в сыворотке крови пациентов снижался. В первой группе содержание АДФГ снизилось на 3,8 %, КДФГ — на 2,75 %. Во второй группе: АДФГ — на 10,2 %, КДФГ — на 13,9 %. После лечения в первой группе показатели АДФГ превышали показатели в группе контроля на 14,2 %, КДФГ — на 11,3 %, а во второй группе — на 8,4 и 2,4 % соответственно. При сравнении показателей спонтанной и металлкатализируемой ОМБ уровень продуктов металлкатализируемого окисления для второй группы после лечения был значительно ниже, чем в первой группе.

Полученные данные свидетельствуют о более отчетливом положительном эффекте лечения пациентов второй группы, в которой была применена комплексная терапия, включающая комбинацию канефрона Н и тиотриазолина. При оценке металлкатализируемой ОМБ сыворотки крови было установлено существенное увеличение степени деструкции белков (повышение как АДФГ, так и КДФГ), что указывает на количество субстрата для окисления и возможность его вовлечения в эти процессы.

Для оценки состояния антиоксидантных систем организма была проанализирована активность ключевого фермента антиоксидантной защиты — СОД.

В начале лечения активность СОД у пациентов первой и второй группы значительно не различалась, но была повышена в сравнении с группой контроля в 2,22 (первая группа) и 2,21 (вторая группа) раза (табл. 3).

После лечения наблюдалось снижение активности СОД как в первой, так и во второй группе, однако показатели первой группы изменились меньше, чем показатели второй. Так, показатели СОД первой группы снизились на 20,77 %, второй группы — на 37,16 %. Но, несмотря на снижение показателей, активность СОД в обеих группах осталась выше показателей группы контроля. Так, в первой группе активность СОД превысила контроль в 1,76 раза, а во второй — в 1,39 раза.

Полученные данные свидетельствуют о более эффективном лечении пациентов второй группы, в лечебный процесс которой была включена комбинация препаратов канефрон Н и тиотриазолин.